ИФА является быстрым, чувствительным, точным и надежным количественным методом анализа. Подготовка образцов для ИФА играет решающую роль в успешном эксперименте. Время отбора, обработка и хранение образцов — всё это влияет на результат анализа.
В этой статье описываются нетривиальные образцы, такие как мокрота, кожа, кал, БАЛ, слюна, спинномозговая жидкость, сперма, молоко.
1. Мокрота
Мокрота должна быть обработана перед проведением анализа. Смешать мокроту с 0,1% DTT (дитиотреитол) (двукратный объем) и шейкировать в течение 5 минут при 37° С. Добавить PBS (двукратный объем), шейкировать снова в течение еще 15-20 минут. После фильтрования через проволочную сетку (150 меш), удалить твердые частицы центрифугированием в течение 10 минут на 1500 об/мин.
2. Кал
Постарайтесь собрать не водянистый стул, так как это будет влиять на точность обнаружения. Вес более 50 мг. Трижды промойте PBS. Конечное соотношение [фекальные массы : PBS] = [1 : 9].
После измельчения ультразвуком или ручного дробления центрифугируйте при 5000g в течение 10 минут. Для анализа используйте полученный супернатант.
3. Слюна
Собрать образцы в центрифужную пробирку, а затем заморозить при -70 ° С на 1 час. Разморозить на льду и центрифировать при 2000g в течение 10 минут. Перенести осветленный супернатант в чистую пробирку для использования в анализе.
4. Семенная жидкость
Собрать сперму в стерильные контейнеры. Нормальная сперма имеет желеобразную консистенцию, поэтому требуется осуществить разжижение при помощи фибринолитических ферментов при комнатной температуре или водяной бане 37° С. Затем центрифугировать при 4000 об/мин в течение 10 минут, чтобы отделить семенную плазму для анализа.
5. Кожа
В день анализа оттаять биопсийные образцы. 20-50 мг влажной ткани гомогенизировать с помощью гомогенизатора Polytron в охлажденном PBS, содержащим коктейль ингибиторов протеаз. Гомогенаты центрифугировать в течение 20 минут при 10000g, чтобы удалить твердые частицы и нерастворимые вещества.
6. Молоко
Образец молока центрифугировать при 12000g 30 минут при температуре 4° С, после удаления липидов образцы могут быть использованы для анализа или сохранены для последующего использования.
7. Спинномозговая жидкость, БАЛ
После сбора центрифугировать образцы при 1000g в течение 20 минут для получения супернатанта.
Так как белки, как правило, легко быть денатурируют и деградируют, следовательно, процесс подготовки должен быть максимально мягким, как это возможно. Условия хранения образцов также очень важны, особенно следует избегать повторения циклов замораживания / оттаивания. Образцы можно аликвотировать. Время хранения не должно превышать одну неделю, если хранение происходит при температуре 4°С, и не должно превышать 1 месяц, если хранение происходит при -20°С, а при -80°С, не должна превышать 2 месяца. Перед процедурой анализа температура образцов должна быть доведена до комнатной температуры, использовать нагревание образцов для ускорения процесса запрещено.
Если у Вас имеются вопросы по приготовлению образцов для ИФА, пожалуйста, свяжитесь с нами:
+7 (495) 798-02-48
+7 (865) 228-34-60
+79624027749 (Чат Viber)
sales@immunotex.ru
sales.imm
+79624027749 (Чат WhatsApp)
Набор для определения С3 компонента комплемента (С3) методом ИФА (человек)
ELISA Kit for Anti-Myelin Associated Glycoprotein Antibody (Anti-MAG)Набор для определения антител к миелин-ассоциированному гликопротеину
Trefoil Factor 3, Intestinal (TFF3)Фактор трилистника 3
Vascular Adhesion Protein 1 (VAP1)Белок сосудистой адгезии-1
ELISA kit for IL2 receptorНабор для определения рецептора интерлейкина 2 (IL2R) (человек)
Московский государственный университет
Исследовательский центр им.Алмазова
НЦ вирусологии и биотехнологии "Вектор"
Институт медико-биологических проблем РАН
Институт Цитологии и Генетики СО РАН
Институт физиологии им. Павлова
Сеченовский Университет
МНТК Микрохирургии глаза им.Федорова
МФТИ
Институт экспериментальной медицины
Исследовательский центр им. Дмитрия Рогачева
НИЦ Курчатовский институт
Петербургский институт ядерной физики им. Б.П.Константинова
НИИ глазных болезней им. Гельмгольца
НЦ акушерства, гинекологии и перинатологии им.Кулакова
ИЭФБ РАН им.Сеченова
Национальный исследовательский университет Лобачевского
Томский научный исследовательский медицинский центр
Казанский Федеральный Университет
СЗГМУ им.Мечникова
Балтийский федеральный университет
Научный центр неврологии
Северо-Кавказский федеральный университет
Дальневосточный федеральный университет
ФНКЦ физико-химической медицины
ФНКЦ реаниматологии и реабилитологии
Сибирский федеральный университет
Институт биологии гена РАН
ФИЦ Питания и биотехнологий
Сибирский медицинский университет
Институт биофизики клетки РАН
НИПИ им. Бехтерева
Институт Фундаментальных Проблем Биологии РАН
Институт токсикологии ФМБА России
НИИ Акушерства и гинекологии им. Отта
НИИ Психического здоровья
РМАПО
Красноярский медицинский университет им. Войно-Ясенецкого
Алтайский медицинский университет
Ниармедик
Волгоградский медицинский университет
Новосибирский медицинский университет
РНИОИ
ИБХ РАН им. акад. Шемякина и Овчинникова
Петровакс Фарм
Южно-Уральский государственный университет
ПИМУ
ФНЦ Пищевых систем им.Горбатова РАН